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几种分离空肠弯曲菌的方法介绍
点击次数:121 发布时间:2018-10-30

弯曲菌(Campylobacterspp.)是导致人类食源性腹泻的主要病原菌之一,其感染已成为全球范围内引起细菌性肠胃炎的主要病因。目前,弯曲菌属已被鉴定有26个种。

 

空肠弯曲菌和结肠弯曲菌是弯曲菌属中引起大多数的人类疾病的主要菌种,由空肠弯曲菌引起超过90%人类疾病感染,除急性肠胃炎,其感染还可并发严重的格林-巴利综合征,可导致人呼吸肌麻痹而死亡。剩余大多数人类疾病由结肠弯曲菌引起。

 

 

如何高效的检测出空肠弯曲菌,成为了检测人员关心的重要问题。本文缔一生物为您介绍几种空肠弯曲菌检测方法。

 

传统检测方法

根据选择性培养基生长特征、镜检和诸多生化指标来判别。根据 ISO10272-2017 方法和国标 GB 4789.9-2014 方法,空肠弯曲菌是能水解马尿酸盐的弯曲菌,并且是区分空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的生化指标。一般步骤分样品处理、增菌与预增菌、分离、鉴定四个步骤,菌种分离是实验成功的关键问题。

 

分离空肠弯曲菌缔一生物为您推荐使用HiMedia公司(国际知名微生物公司)弯曲菌显色培养基(货号:M2020)进行分离。常见的空肠弯曲菌分离平板为mCCDA,HiMedia在mCCDA平板上进行改良,可支持弯曲杆菌的丰饶生长,在此培养基中呈现浅紫至紫色的菌落,比通常mCCDA平板容易分离,可对食品和临床样品对弯曲杆菌进行选择性分离和鉴定。

 

传统检测方法具有仪器、设备要求不高,检测成本低等优点,目前仍是质检部门检测弯曲菌的主要检测方法。

 

免疫传感器方法

生物传感器是对生物物质敏感并能将其浓度转换为电信号等进行检测的仪器。它是由固定化的生物敏感材料作识别元件(包括酶、抗原、抗体、微生物、细胞、组织、核酸等生物活性物质)、信号转换器(如氧电极、光敏管、场效应管、压电晶体等)及信号放大装置构成的分析工具或系统组成。待测物与识别元件发生作用后,所得产物(光、热等)通过信号转换器转变为可以输出的电信号、光信号等,从而达到分析检测物的目的。

 

基于生物传感器的方法自动化程度高,对人员的要求不高,可实现对样品的现场实时无损检测,但在食品基质中的检测效果一般。

 

基于质谱的方法

 

基质辅助激光解吸电离飞行质谱(MALDI-TOF-MS)是近年来发展起来的一种新型的用于微生物鉴定和分型的技术。其原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜,基质从激光中吸收能量,样品解吸附,基质-样品之间发生电荷转移使得样品分子电离,电离的样品在电场作用下飞过真空飞行管,通过离子的质量电荷之比(M/Z)与离子的飞行时间成正比来分析离子,并测得样品分子的分子量。不同的细菌经过 MALDI-TOF-MS 检测可以形成特异性的指纹图谱,将待测菌的指纹图谱与已有的质谱图谱库比较,即可确定细菌种属。

 

基于质谱的方法虽然快速可靠,但主要应用于对纯菌株的鉴定分型,要达到直接从样品中分析弯曲菌菌种的目的,则需要调整试验策略建立一系列适合弯曲菌的重现性好的分析方法。

 

实时荧光 PCR 法

实时荧光 PCR 技术是将传统的 PCR 扩增和检测相结合,在 PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程,通过标准曲线对未知模板进行定性定量分析的方法。根据荧光标记方法一般分为染料法和探针法。

 

与传统的 PCR 相比,实时荧光 PCR 方法具有特异性更强、灵敏度更高、自动化程度高、有效解决 PCR 污染问题等优点,在 21 世纪初已广泛应用于各种领域,包括弯曲菌等食源性致病菌的快速检测中。但对人员的要求较高,也需特定的较为昂贵的仪器,使其在实际应用中受限。

 

检测空肠弯曲菌的方法很多,各有利弊,建立一个更快速简便、更稳定可靠、更高效准确、更低成本的弯曲菌检测技术是保证公共卫生和食品安全的迫切需求。可以预见,多种检测技术的有机结合和优势互补有望解决上述需求。

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